方法一、GC-MS 法 參照GB 5009.223-2014

摘要：本文參照食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法《GB 5009.223-2014 食品中氨基甲酸乙酯的測(cè)定》 ，進(jìn)行了白酒中氨基甲酸乙酯含量的測(cè)定。采用商品化Cleanert EC氨基甲酸乙酯固相萃取柱（堿性硅藻土）進(jìn)行樣品前處理，GC-MS法測(cè)定，結(jié)果表明氨基甲酸乙酯檢出限為2.0μg/kg，定量限為5.0 μg / kg（取樣2.00g），回收率在98.3%～104.5%；白酒樣品的日間精密度測(cè)試，RSD<3%。方法簡(jiǎn)單，產(chǎn)品穩(wěn)定，結(jié)果準(zhǔn)確靈敏，*分析檢測(cè)的要求。

       氨基甲酸乙酯(Ethyl Carbamate, EC)，是一種致癌物，可以引起肺腫瘤、淋巴癌、肝癌、皮膚癌等。它是發(fā)酵食物和酒*品在發(fā)酵或貯存過(guò)程中天然產(chǎn)生的污染物。2007年，世界衛(wèi)生組織的癌癥研究機(jī)構(gòu)( IARC) 正式將氨基甲酸乙酯( Ethyl Carbamate) 歸為2A類(lèi)致癌物。因此對(duì)相關(guān)食品中進(jìn)行氨基甲酸乙酯的檢測(cè)和監(jiān)測(cè)是非常必要的。

一、試劑和材料

標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

       1.0 mg/mL D5-氨基甲酸乙酯貯備液：準(zhǔn)確稱(chēng)取10.0 mg D5-氨基甲酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇定容至10 mL。

       2.0 μg/mL D5-氨基甲酸乙酯使用液：準(zhǔn)確吸取1.0 mg/mL D5-氨基甲酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)貯備液0.1 mL，用甲醇定容至50 mL。

       1.0 mg/mL氨基甲酸乙酯貯備液：準(zhǔn)確稱(chēng)取0.5000 g氨基甲酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇定容至50 mL。 

       分別準(zhǔn)確吸取一定量氨基甲酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)，加100 μL  2.0 μg/mL的D5-氨基甲酸乙酯溶液，用甲醇定容至1.0 mL，得到10.0、25.0、50.0、100.0、200.0、400.0、1000.0 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)使用液（內(nèi)含200.0 ng/mL D5-氨基甲酸乙酯）

固相萃取柱：Cleanert EC氨基甲酸乙酯固相萃取柱（堿性硅藻土）

氣相色譜柱：DA-INNOWAX柱

二、實(shí)驗(yàn)方法

樣品前處理

   準(zhǔn)確量取 2.00 ml 酒樣，加 100 μL  2.0 μg/ mL D5-氨基甲酸乙酯內(nèi)標(biāo)使用液、氯化鈉 0.3 g（白酒、醬油不加），超聲溶解、混勻，然后加樣到氨基甲酸乙酯柱上，讓試樣慢慢滲入到Cleanert EC氨基甲酸乙酯固相萃取柱中，靜置約 10 min，先用 10 mL 正己烷淋洗除雜，然后用 10 mL 5%乙酸乙酯/乙mi溶液以1 mL/min 流速洗脫并收集于10 mL 具塞刻度試管中，在室溫下用氮?dú)饩従彺抵?/SPAN>0.5mL 左右，用甲醇定容至1.0 mL 制成測(cè)定液供GC/MS分析，同時(shí)做空白。

GC-MS條件

       色譜柱：DA-INNOWAX氣相柱，30 m*0.25 mm*0.25 μm；

       進(jìn)樣口溫度：220℃；柱溫：初溫 50℃，保持 1 min，然后以 8℃ / min 升至 180，然后以 15℃/ min 升至 210℃ 保持5 min；

       載氣：氦氣，純度≥99.999％

       流速：1 mL/min；

       電離方式：EI源。

       離子源溫度：230℃；

       進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣；

       樣量：1-2μL；

       氨基甲酸乙酯選擇監(jiān)測(cè)離子（m/z）： 62、76、89；定量離子62；

       D5-氨基甲酸乙酯選擇監(jiān)測(cè)離子（m/z）64、76；定量離子64

三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

色譜圖

圖1 氨基甲酸乙酯及內(nèi)標(biāo)總離子圖

圖2 氨基甲酸乙酯質(zhì)譜圖

3 內(nèi)標(biāo) D5-氨基甲酸乙酯質(zhì)譜圖

標(biāo)準(zhǔn)曲線

酒樣加標(biāo)的回收率及精密度

表1 白酒樣品加標(biāo)的回收率及精密度

表2 白酒樣品日間精密度

注：相同的樣品，，每天測(cè)定2次，連續(xù)7天內(nèi)測(cè)定數(shù)據(jù)

方法檢出限

   當(dāng)試樣取2.00g時(shí)，本方法氨基甲酸乙酯檢出限為2.0μg/kg，定量限為5.0μg/kg。

四、結(jié)論

  本文采用商品化Cleanert EC氨基甲酸乙酯固相柱（堿性硅藻土）前處理結(jié)合DA-INNOWAX氣相柱進(jìn)行白酒中氨基甲酸乙酯的測(cè)定，結(jié)果表明氨基甲酸乙酯檢出限為2.0 μg/kg，回收率在98.3% ～ 104.5%，*食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB5009.223-2014方法的檢測(cè)要求。

五、訂貨信息

方法二、液相方法-熒光檢測(cè)法

一、原理

在鹽酸中，氨基甲酸乙酯與9-羥基噸反應(yīng)，生成具有熒光特性的衍生物，經(jīng)色譜柱分離，熒光檢測(cè)器檢測(cè)，外標(biāo)法定量

二、衍生方法

量取0.02mol/L的9-羥基噸500μL添加到1ml酒精度調(diào)整至40%的樣品或標(biāo)樣中，然后加入100μL的1.5mol/L HCl中，混勻使反應(yīng)*，放暗處衍生至少60min，過(guò)0.45μm濾膜，待測(cè)。

三、樣品前處理方法：同上

四、色譜條件

       色譜柱：Venusil MP C18，4.6 mm*250 mm，5 μm（P/N：VA952505-0）

       流速：0.8 mL/min

       柱溫：30℃

       激發(fā)波長(zhǎng)：233 nm

       發(fā)射波長(zhǎng)：600 nm

       流動(dòng)相：A：0.02M乙酸鈉（pH=7.2），B：乙腈，梯度程序如下

注意事項(xiàng)：

1. 衍生試劑配置完成后，應(yīng)4℃避光保存（有效期1個(gè)月）

2. 在加樣時(shí)，盡量縮短操作時(shí)間，避免衍生試劑見(jiàn)光時(shí)間過(guò)長(zhǎng)分解

3. 該衍生反應(yīng)需要在暗處進(jìn)行

4. 衍生時(shí)間不得少于30min

5. 流動(dòng)相pH值要調(diào)整準(zhǔn)確

    

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